Erytropoetyna jako czynnik angiogenny siatkówki w proliferacyjnej cukrzycowej retinopatii ad 6

Podobne dane otrzymano z innych Western blot (dane nie pokazane). W panelu B do hodowli wzrostowej dodano rekombinowaną erytropoetynę i VEGF. Stymulację wzrostu oceniano mierząc przy 405 nm ilość erytropoetyny i VEGF, którą traktowane komórki zaabsorbowały w porównaniu z kontrolą, przy referencyjnej długości fali 490 nm. Oznaczenia przeprowadzono trzykrotnie i eksperymenty powtórzono trzy razy. Wartości P służą do porównania z próbkami kontrolnymi stymulowanymi solą fizjologiczną buforowaną fosforanem. Dane to średnie . SD. W panelu C próbki kontrolne soli fizjologicznej buforowanej fosforanem lub próbki płynu szklistego od ośmiu pacjentów z proliferacyjną retinopatią cukrzycową dodano do hodowli BREC. Pokazano poziom wzrostu komórek stymulowany płynem szklistym każdego pacjenta. Do kultur dodano rozpuszczalny receptor erytropoetynowy (25 .g na mililitr), rozpuszczalną chimerę Flt-1-Fc (2,5 .g na mililitr) lub kombinację obu białek. Denaturowany rozpuszczalny receptor erytropoetyny (25 ug na mililitr) dodano jako kontrolę. Porównaliśmy cztery grupy, do których dodaliśmy ludzki szklistek według stosunku wzrostu komórek w każdej grupie do tej w grupie kontrolnej, do której dodano roztwór soli buforowany fosforanem w każdym eksperymencie. Wszystkie wartości P służą do porównania z próbkami od każdego pacjenta stymulowanymi jedynie płynem szklistym. Panel D pokazuje średnie hamujące działanie erytropoetyny i blokady VEGF na wzrost komórkowy w każdej próbce, wyrażone jako procent poziomu indukowanego przez stymulację ciała szklistego. Dane to średnie . SD. Erytropoetyna (10 jm na mililitr) zwiększyła fosforylację wewnątrzkomórkowych substratów sygnałowych kinazy białkowej aktywowanej mitogenem STAT5 i 42/44 15 minut po stymulacji BREC. Ten wzrost był hamowany przez dodanie rozpuszczalnego receptora erytropoetyny w stężeniu 2500 razy większym niż erytropoetyna (Figura 2A).
Wpływ erytropoetyny, VEGF i płynu szklistego na wzrost siatkówki komórek śródbłonka
Wzrost BREC stymulowano w sposób zależny od dawki po ekspozycji na erytropoetynę, przy czym maksymalny wzrost komórek obserwowano przy 20 IU erytropoetyny na mililitr (absorbancja, 1,63 . 0,19 razy większa niż w próbkach kontrolnych stymulowanych solą fizjologiczną buforowaną fosforanem ; P <0,001) (Figura 2B). VEGF (10 ng na mililitr) również stymulował wzrost komórek (absorbancja, 1,90 . 0,29, P <0,001). Próbki szkliste od ośmiu pacjentów z proliferacyjną retinopatią cukrzycową stymulowały wzrost BREC, który był znacząco hamowany przez rozpuszczalny receptor erytropoetyny (25 .g na mililitr) we wszystkich przypadkach (zakres hamowania, 22 do 74 procent). Rozpuszczalny Flt-1-Fc hamował również wzrost komórkowy w każdym przypadku (zakres hamowania, 22 do 85 procent) (Figura 2C), i średni efekt hamujący erytropoetyny i blokowanie VEGF na wzrost komórkowy, wyrażony jako procent indukowanego poziomu przez płyn szklisty od każdego z ośmiu pacjentów wynosił 56, 54 i 16 procent po dodaniu rozpuszczalnego receptora erytropoetyny, rozpuszczalnego Flt-1-Fc i obu, odpowiednio. Denaturowany rozpuszczalny receptor erytropoetynowy nie wpływał na proliferację BREC indukowanych przez szkliste próbki od czterech pacjentów z proliferacyjną retinopatią cukrzycową (rysunek 2D).
Ekspresja erytropoetyny i VEGF w niedokrwionych siatkówkach myszy
Rysunek 3
[przypisy: dda jak pomóc, spitaderm karta charakterystyki, neurolog ostrołęka ]
[więcej w: apteka internetowa leki na receptę, korekcja laserowa wzroku, leczenie przerzutów do kości ]