Terapia różnicowania ostrej białaczki promielocytowej za pomocą tretinoiny (kwas all-trans-retinowy) ad

Przeprowadzono testy funkcji wątroby i mierzono poziom cholesterolu i triglicerydów w surowicy dwa razy w tygodniu. Aspirację szpiku kostnego wykonywano mniej więcej raz w tygodniu podczas indukcji, aż do udokumentowania całkowitej remisji lub niepowodzenia. Zaobserwowano konwencjonalne kryteria odpowiedzi.14 Ekstrapolując z badania Castaigne i wsp., 11 potraktowaliśmy pacjentów tretinoiną w dawce 45 mg na metr kwadratowy powierzchni ciała dziennie. W przeciwieństwie do poprzednich badań, 10, 11 w tym badaniu lek był formułowany w miękkie kapsułki żelatynowe podobne do tych stosowanych w amerykańskiej formule izotretinoiny. Z wyjątkiem pierwszego i siódmego dnia, kiedy dawkę całkowitą podano raz rano do badań farmakokinetycznych, lek podzielono na dwie równe dawki podawane w odstępie około sześciu godzin. U pacjentów, którzy uzyskali całkowitą remisję, kolejna terapia zależała od wcześniejszego stanu leczenia. Pacjenci z nowo zdiagnozowaną chorobą otrzymywali tretinoinę przez 30 dni po uzyskaniu pełnej remisji, a następnie otrzymywali konwencjonalną chemioterapię konsolidacyjną lub przeszli przeszczep szpiku kostnego. Jeśli takie leczenie zostanie uznane za niewłaściwe (np. U pacjentów w podeszłym wieku), pacjent może otrzymywać ciągłe leczenie samą tretinoiną. Pacjenci, u których wystąpił nawrót choroby po wcześniejszej chemioterapii, kontynuowali leczenie tretinoiną, o ile nie kwalifikują się do przeszczepu szpiku kostnego. Pacjenci lub ich opiekunowie wyrazili na piśmie świadomą zgodę, a badanie zostało zweryfikowane i zatwierdzone z wyprzedzeniem przez instytucyjną komisję odwoławczą ośrodka.
Immunofenotypowanie antygenów na powierzchni komórki
Jednojądrzaste komórki szpiku kostnego rozdzielano przez sedymentację gęstości Ficoll-Hypaque, a komórki krwi obwodowej analizowano jako krew pełną za pomocą systemu Q-Prep (Coulter Immunology, Hialeah, Fla.). Stosując dwukolorową fluorescencję komórek bramkowanych zgodnie z rozmiarem i rozpraszaniem w przód analizowanym na cytometrze przepływowym profilu EPICS (Coulter), 15 określiliśmy ekspresję panelu antygenów, w tym CD33 (wczesna szpikowa) i CD16 (późna szpikowa). 16 Wszystkie komórki w próbce analizowano za pomocą maksymalnie trzech bramkowanych klastrów (map bitowych), aby umożliwić równoczesną analizę różnych populacji komórek w pojedynczej próbce.
Cytometria przepływowa DNA
Jednojądrzaste komórki szpiku kostnego oddzielono przez odwirowanie w gęstości i wybarwiono pomarańczą akrynową, jak opisano wcześniej. 17 Fluorescencję 10000 komórek zmierzono zmodyfikowanym cytometrem przepływowym FacScan (Becton Dickinson, Mountainview, CA). Histogramy analizowano za pomocą oprogramowania CellFit (Becton Dickinson).
Analiza Northern Blot dla ekspresji RAR-.
Całkowity komórkowy mRNA oczyszczono z komórek jednojądrzastych szpiku kostnego oddzielonych przez odwirowanie Ficoll-Hypaque za pomocą ustalonej techniki.18 Przeprowadzono analizę Northern błot na RNA, jak opisano wcześniej.6 Otrzymane filtry hybrydyzowano z cięciem PstI o 600 parach zasad. ludzki komplementarny DNA dla RAR-.19 i zostały przemyte rygorystycznie w 56 ° C.6
Analiza Southern Blot dla rearanżacji genomowych RAR-.
Genomowy DNA przygotowano jak opisano wcześniej. W przypadku Southern blotting, 10 .g genomowego DNA trawiono całkowicie przez trzy godziny EcoRI lub HindIII (2 do 3 U na mikrogram DNA) (Boehringer-Mannheim, Indianapolis), wielkość frakcjonowana na 0,8% żel agarozowy, denaturowany, renaturowany, zobojętniony i przeniesiony na filtry nitrocelulozowe21. Filtry hybrydyzowano następnie do 640-zasadowej pary RI-SstI ciętego komplementarnego DNA19 RAR-a i przepłukano w temperaturze 55 ° C. 20 Autoradiografów otrzymany po ekspozycji w temperaturze -70 ° C na film XAR (Kodak, Rochester, NY) z zastosowaniem ekranu intensyfikującego.
Przedwczesna kondensacja chromosomów i hybrydyzacja fluorescencyjna in situ
Krew obwodową poddano dwustopniowemu wirowaniu w gradiencie gęstości na gradiencie Ficoll-Hypaąue w celu rozdzielenia komórek na frakcje jednojądrzaste i polimorfojądrowne.22 Komórki z każdej frakcji połączono z mitotycznymi komórkami jajnika chomika chińskiego znakowanymi 5-bromodeoksyurydyną w celu indukowania przedwczesnego chromosomu. kondensacja w jądrach komórek krwi, jak opisano wcześniej. 23, 24 Hybrydyzację in situ na tych preparatach z sondami specyficznymi dla chromosomów przeprowadzono z modyfikacją techniki opisanej przez Pinkel i wsp. 25 Biblioteka fagowa DNA ludzkiego chromosomu 17 ( LN17NS03) uzyskano z American Type Culture Collection i zamplifikowano, a DNA wyizolowano, nicprzeskładano i znakowano trifosforanem 16-deoksyurydyny biotyny.
[przypisy: mica w kosmetykach, odbudowa zeba cena, przychodnia chełm rejestracja ]